半制備液相色譜儀的開機與系統(tǒng)自檢流程解析
1.開機準備與系統(tǒng)自檢?
電源啟動順序:先開啟計算機電源,待系統(tǒng)穩(wěn)定后依次啟動高壓輸液泵、柱溫箱、自動進樣器及檢測器,確保各模塊自檢完成。
軟件聯(lián)機:雙擊色譜工作站,輸入用戶權(quán)限并選擇對應(yīng)的色譜系統(tǒng),建立儀器方法組。
2.流動相配制與儀器沖洗?
流動相選擇與過濾:根據(jù)樣品性質(zhì)配制流動相(需色譜級試劑),使用0.45μm或0.22μm濾膜過濾(有機相用有機濾膜,水相用水系濾膜)。
泵排氣泡:將泵頭吸濾頭浸入流動相,通過注射器抽液閥排空氣泡,設(shè)置流速3-5mL/min沖洗泵頭5分鐘,確保無氣泡殘留。
進樣針清洗:通過軟件控制自動進樣器進行多次操作,或手動用純甲醇沖洗注射器以去除氣泡。
3.色譜柱平衡與基線監(jiān)測?
平衡系統(tǒng):設(shè)置初始流速和流動相比例,運行泵至壓力穩(wěn)定,通過工作站實時監(jiān)測基線,待基線平穩(wěn)后準備進樣。
柱溫控制:若使用柱溫箱,需提前設(shè)置溫度(通常為室溫或根據(jù)方法要求),確保分離條件穩(wěn)定。
4.樣品進樣與分離?
進樣操作:將樣品溶解過濾后,通過自動進樣器或手動進樣閥注入樣品(典型進樣量0.1-2000μL),設(shè)置保留時間并啟動分離程序。
梯度洗脫:若需梯度分離,通過軟件設(shè)置溶劑比例變化程序,動態(tài)混合流動相以實現(xiàn)高效分離。
數(shù)據(jù)采集:檢測器實時采集信號(如紫外吸收或蒸發(fā)光散射信號),工作站生成色譜圖并記錄保留時間及峰面積數(shù)據(jù)。
5.關(guān)機與系統(tǒng)維護?
色譜柱清洗:
若流動相含緩沖鹽,先用高比例水(如90%水/10%有機相)沖洗1小時,再用純有機相(甲醇/乙腈)沖洗30分鐘,最后保存于純有機相中。
無緩沖鹽時,直接用有機相沖洗30分鐘。
儀器關(guān)機:停流速后關(guān)閉工作站,依次關(guān)閉檢測器、泵、柱溫箱及電源,最后關(guān)閉計算機。
管路維護:長期停用時,管路需充滿純甲醇以防止溶劑揮發(fā)或污染。
